胞子别离法也称为胞子弹射别离法，是操纵某些药用实菌子实体成熟后自行弹射胞子的特征，在无菌前提下，使弹射的胞子落到适宜培育提拔基上，在适宜前提下停止培育提拔，胞子萌生成菌丝，从而获得纯菌种的一种办法。(1) 别离素材的抉择与消毒胞子别离素材，来自于多年人工培育提拔的优良品系和野生的种菇。
在统一个生长前提下，培育提拔统一种药用实菌差别的品系，其消费效益和操行有很大差别；而统一个品系培育提拔在差别的情况前提下，其优良性状表示也差别，就是在不异情况前提下培育提拔的统一个品系，其单株之间也会呈现差别。因而，应抉择持久培育提拔的优良品种的优良单株做为别离素材。
野生的菌株，未颠末人工培育提拔，不知其优良性状、抗逆才能和消费性能若何，只能做为育种搜集原始素材时停止胞子别离，颠末培育提拔品系之间比照试验，抉择优良者停止消费，在选优往劣的培育提拔过程中，再在群体中抉择优良个别，做为胞子别离的素材。抱负的种菇应该是具有该品种次要典型的特征，发育一般，个别强健，无病虫害，成熟适度的子实体。
种菇选定后，可将其四周 10厘米摆布范畴内的小菇全数摘除，恰当增加喷水量，有的药用实菌子实体有菌幕包着，即可待种菇有八、九分红熟时，及时摘摘停止消毒。可剪往菌柄的三分之二，用清水洗往黏附的污物，浸进0。 1%的升汞溶液中1~2分钟或在70%的酒精中浸几秒到1分钟，取出后用无菌水频频冲刷数次，用灭菌的纱布或滤纸吸干外表水分后待用。
有些药用菌如香菇的子实体，很小时菌幕就被拉开；或有的品种底子无菌幕，菌褶裸露于空气中，很难制止有杂菌胞子附着在菌褶上，则应摘摘成熟的子实体，剪往三分之二的菌柄，用 75%的酒精揩擦菌盖及菌柄外表，并在插人胞子搜集器后6~12小时内，种菇胞子已弹出而附在上面的杂菌胞子短时间内还未脱落时取出子实体。
而关于胶量菌类的子实体，只能用无菌水洗涤，用无菌纱布吸干外表水分后待用。(2) 胞子的摘集种菇经消毒处置后，即可摘用以下办法搜集胞子。胞子弹射摘集法：操纵胞子主动弹射出子实层的特征，摘集胞子。一般摘用整株插种法、三角瓶钩悬法和试管贴附法，全数操做过程都应该在无菌前提下停止。
① 整株插种法：适于伞菌类胞子的摘集。起首应预备好胞子摘集器，用搪瓷盘或大于钟罩的培育提拔皿做底盘，上面放一个小培育提拔皿，皿内放一个不锈钢的收架，用钟罩盖在小培育提拔皿上，将整套胞子摘集器用双层纱布或报纸包好，经高压灭菌后备用。在无菌前提下翻开胞子摘集器，揭往钟罩，为了避免钟罩与培育提拔皿接触处杂菌侵人和增加摘集器内部的湿度，在大培育提拔皿内展 2~3层灭菌的纱布或脱脂棉，倒人0。
1 %的升汞液，以浸湿纱布为度，然后放人小培育提拔皿，将消毒后的子实体插在收架上盖钟罩后，根据差别别离对象，移至18~25°C前提下，培育提拔6小时至2天，待小皿内弹射并堆积一层胞子后，移进无菌室，先用75%的酒精或0。1%升汞擦拭钟罩外部，翻开钟罩取出子实体，小培育提拔皿加盖密封，供别离用。
② 三角瓶钩悬法：适用于不具菌柄子实体胞子的摘集，如胶量菌银耳、木耳等。在无菌前提下，将耳片用无菌水冲刷数次后，用无菌纱布吸干水分，将耳片挂在金属钩上，钩子的另一端挂在三角瓶口上，瓶内拆有PDA培育提拔基，加棉塞，置25°C温度下培育提拔 1~2天，当培育提拔基外表有一层胞子粉时，把三角瓶拿到无菌室取出耳片和钩子，仍塞好棉塞陆续培育提拔。
③ 贴附法：取一块经消毒的成熟菌褶或耳片，用灭菌的琼脂或浆糊，黏附在拆有PDA培育提拔基的试管斜面或培育提拔皿皿盖正上方，加棉塞或盖皿盖后置室温下培育提拔，待胞子天然落下后，在无菌室内慑除菌褶或耳片，或将落有胞子的培育提拔基转移在新的试管斜面及培育提拔皿平板培育提拔基上，加塞或加盖后陆续培育提拔。
④ 胞子印摘集法：取成熟的子实体经外表消毒后，切往菌柄，置于灭过菌的白色或黑色蜡光纸上，罩上通气钟罩，在24°C下静置数小时后，悄悄移往种菇，可见有大量胞子落在纸上。将有胞子印的纸在无菌前提下保留备用。⑤ 菌褶涂抹法：在接种室内，将成熟的子实体外表消毒，往掉菌柄，用消毒的接菌环插进两片菌褶之间，悄悄涂抹褶片，将尚未弹射的胞子沾在接种环上，然后用划线法接种在预备好的斜面培育提拔基上或平板培育提拔基上。
操做时，要严厉在无菌前提下，动做要准确。⑥ 空中胞子捕获法：伞菌子实体成熟后，胞子大量弹射，在子实体四周可见烟雾状的“胞子云”，将预备好的培育提拔基平板或试管口迎着“胞子云”标的目的，使胞子附着在培育提拔基外表，随即盖上皿盖或加棉塞即可。(3) 胞子的别离摘集到的胞子，一般需要颠末别离抉择后，才气造造原种。
胞子的别离根据接种到培育提拔基上的胞子数量而分单孢别离和多孢别离两种。有些菇类的胞子，具有单孢结菇的才能，可摘用单孢别离纯菌种的办法；有些品种如香菇、木耳、金针菇等药用实菌的单孢菌丝，只要颠末量配后才气结菇，多摘用多孢别离法，多孢别离办法简单、易操做、没有不孕现象，在消费上常摘用；但不克不及抉择优良单孢繁育后代，假设停止杂交育种时，仍应停止单孢别离。
单孢别离：从摘集到的胞子群中，挑出单个胞子停止培育提拔，零丁萌生成菌丝而获得纯菌种的办法。按别离手段可分为稀释法、划线法、毛细管别离法和器械别离法。多孢别离：因摘收胞子的体例差别，可分为间接培育提拔法、斜面划线法、涂布别离法。① 间接培育提拔法：摘用胞子弹射别离法、菌褶涂抹法及捕获法搜集到培育提拔基上的胞子，间接放在25°C下培育提拔；待胞子萌生后挑选特征典型的菌落，转接培育提拔即可。
② 斜面划线法：在无菌前提下，用接种针沾取少量搜集到的胞子，在PDA斜面培育提拔基上自下而上划线，划线时不要太用力，以能划破培育提拔基外表的力度。接种后加棉塞，置适温下培育提拔，待胞子萌生后，挑选萌生早、生长兴旺的菌落，转接到新试管斜面培育提拔基上再行培育提拔即可。
③ 涂布别离法：在无菌前提下，用接种环挑取少许搜集到的胞子，拆人有无菌水的试管中，足够摇匀造成胞子悬浮液，然后用无菌的打针器或滴管，吸收胞子悬浮液，注人1~2滴于斜面或平板培育提拔基外表，用无菌接种环涂匀，置适温下培育提拔。胞子萌生后，挑选发育匀称、生长快的菌落，再移接到新试管斜面培育提拔基上，恒温培育提拔即得母种。