我们晓得,在Western Blotting中利用内参其实就是在WB过程中的别的用内参对应的抗体检测内参卵白,如许在检测目标产品的同时能够检测内参的表达,因为内参在各组织和细胞中的表达相对恒定,借助检测每个样品内参的量就能够用于校正上样误差,如许半定量的成果才更为可信。
此外利用内参能够做为空白对照,检测卵白转膜情况能否完全、整个Western Blot显色或者发光系统能否一般。
常用的细胞总卵白量内参有GAPDH和细胞骨架卵白β-Actin或β-Tubulin等。关于一些动物的样本,则需要出格的动物Actin卵白做为内参。
当尝试样品中只是核卵白,而不是细胞总卵白提取液时,能够用组卵白H(Histone H),或者增殖细胞核抗原(PCNA)等为核内参抗体。而在一些出格的针对线粒体做为微情况的研究课题时,需要提取线粒体总卵白并检测此中的目的卵白含量,那时候常规的细胞总卵白内参就不是很适宜,我们保举利用线粒体总卵白的内参抗体,关于线粒体卵白的检测,常用COX IV或VDAC1做为内参抗体,那里面COX IV又是被引用最多的线粒体内参。
COX IV的检测分子量大约在16kD摆布,比力合适用于检测目的卵白在较大的WB尝试。
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